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分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光线透过测试的样品后，部分光线被吸收，计算样品的吸光值，微量紫外分光光度计，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式：
a=-lg(i/i0)=-lgt=klc
式中 :a 为吸光度；
i0为入射的单色光强度；
i 为透射的单色光强度；
t 为物质的透射率；
k 为摩尔吸收系数；
l 为被分析物质的光程，即比色皿的边长；
c 为物质的浓度；
分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性或定量分析。常用的波长范围为：(1)200～380nm的紫外光区，(2)380～780nm的可见光区，(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm<-1>;～400cm<-1>;）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为---测量的精密度和准确度，所有仪器应按照计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。
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